碧云天脂質(zhì)氧化MDA檢測(cè)試劑盒(S0131S) (Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用MDA和TBA反應(yīng)生成紅色產(chǎn)物的顯色反應(yīng)，通過(guò)比色法定量檢測(cè)血漿、血清、尿液、動(dòng)植物組織或細(xì)胞裂解液中的MDA含量。該試劑盒廣泛應(yīng)用于脂質(zhì)氧化水平的檢測(cè)。

MDA是生物體脂質(zhì)氧化的自然產(chǎn)物，在氧化應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生。脂質(zhì)氧化導(dǎo)致脂肪酸逐漸分解為多種化合物，包括MDA。通過(guò)檢測(cè)MDA水平，可以評(píng)估脂質(zhì)氧化程度，因此MDA測(cè)定被廣泛應(yīng)用于脂質(zhì)氧化的評(píng)估。雖然生物體內(nèi)其他生化反應(yīng)也會(huì)產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase的催化作用，但通過(guò)適當(dāng)?shù)膶?duì)照設(shè)置，可以準(zhǔn)確觀察脂質(zhì)氧化水平的變化。

本試劑盒中采用了特殊的抗氧化劑，可以有效地抑制樣品在檢測(cè)過(guò)程中產(chǎn)生新的MDA，使檢測(cè)更加準(zhǔn)確。同時(shí)本檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)過(guò)程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA，使對(duì)脂質(zhì)氧化的測(cè)定更加準(zhǔn)確。

本試劑盒可以檢測(cè)低達(dá)1μM的MDA，也可檢測(cè)高達(dá)200μM的MDA。血漿、血清樣品中的MDA含量通常在約2-4μM，尿液中的MDA含量通常在約5-30μM，在本試劑盒的檢測(cè)范圍內(nèi)，可以直接用本試劑盒檢測(cè)血漿、血清、尿液樣品等。

使用說(shuō)明：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測(cè)定。

b.對(duì)于組織，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%；對(duì)于細(xì)胞，每100萬(wàn)細(xì)胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測(cè)定。對(duì)于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的，可以使用0.2微米孔徑的過(guò)濾器過(guò)濾以獲得澄清的樣品溶液。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進(jìn)行操作。

c. 對(duì)于組織或細(xì)胞樣品，樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的MDA含量。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

TBA儲(chǔ)存液的配制：稱(chēng)取適量TBA，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲(chǔ)存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需wan全溶解后再使用，可以加熱到70℃以促進(jìn)溶解。TBA儲(chǔ)存液較難溶解，需加熱到70℃，并通過(guò)劇烈Vortex以促進(jìn)溶解。配制好的TBA儲(chǔ)存液室溫避光保存，至少3個(gè)月內(nèi)有效。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)喝∵m量標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、2、5、10、20、50μM，用于后續(xù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品中MDA的濃度很高，可以增加100、150和200μM的標(biāo)準(zhǔn)品濃度。

3. 樣品測(cè)定:

a. 在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當(dāng)溶液作為空白對(duì)照，加入0.1ml上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入0.1ml樣品用于測(cè)定；隨后加入0.2ml MDA檢測(cè)工作液。

b. 混勻后，100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時(shí)務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進(jìn)行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。zui方便和準(zhǔn)確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。
c. 水浴冷卻至室溫，1000g室溫離心10分鐘。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標(biāo)儀在532nm測(cè)定吸光度。如果不方便測(cè)定532nm的吸光度，也可以測(cè)定530-540nm之間的吸光度?？梢栽O(shè)定450nm為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
d. MDA含量的計(jì)算：對(duì)于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得MDA的摩爾濃度，對(duì)于細(xì)胞、或組織樣品，計(jì)算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過(guò)單位重量的蛋白含量或組織重量等來(lái)表示最初樣品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

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