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百奧益康小鼠腦組織解離試劑盒的原理

 更新時間:2025-03-04 點擊量:187

百奧益康小鼠腦組織解離試劑盒(BA3305)是基于現(xiàn)代細胞生物學(xué)和酶工學(xué)原理設(shè)計的專業(yè)工具,旨在高效獲取高活性、高完整性的單細胞懸液。其核心技術(shù)通過選擇性酶解和物理篩分雙模式協(xié)同作用,在保護細胞膜完整性的同時實現(xiàn)神經(jīng)組織的精準(zhǔn)解離。

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一、核心組分協(xié)同機制

試劑盒包含特異性復(fù)合酶系統(tǒng)(含Collagenase IV/DNase I/Papain復(fù)合物)、細胞保護劑(含BSA和鈣離子螯合劑)、紅細胞裂解緩沖液及梯度篩網(wǎng)組件。復(fù)合酶溶液采用0.22μm微濾除菌技術(shù)保持酶活性穩(wěn)定,其中:

·膠原酶IV靶向分解腦微血管基底膜的型膠原網(wǎng)絡(luò)

·木瓜蛋白酶選擇性切割細胞間黏附蛋白(如N-Cadherin

·DNAI有效降解死亡細胞釋放的基因組DNA
特殊添加劑通過維持鈣離子動態(tài)平衡(0.5-1.0mM濃度調(diào)控),在解離過程中激活Calpain抑制系統(tǒng),將乳酸脫氫酶泄漏率控制在<8%。

二、分步作用原理

1. 前處理階段4℃冷消化)
組織塊經(jīng)HBSS漂洗后預(yù)冷處理,溫度敏感性膜通道蛋白進入低代謝狀態(tài)。梯度篩網(wǎng)(200μm→100μm)預(yù)篩除去血管殘骸,降低后續(xù)酶解負荷。

2. 溫和酶解
37℃震蕩孵育(120rpm,15-20min)時,復(fù)合酶穿透軟腦膜結(jié)構(gòu):

·膠原酶IV裂解血管周細胞外基質(zhì)(ECM)糖蛋白

·特異性底物識別系統(tǒng)確保神經(jīng)突觸連接蛋白(Synaptophysin)保留率>92%

·實時pH監(jiān)測模塊維持溶液在7.2±0.3最佳活性區(qū)間

3. 機械輔助解離
配套40μm細胞濾網(wǎng)配合反向沖洗技術(shù),利用層流剪切力分散細胞團塊。zhuan-li波形離心管設(shè)計100g×5min離心時形成渦旋梯度,實現(xiàn)活細胞(>95%臺盼藍拒染率)與碎片的高效分離。

三、技術(shù)創(chuàng)新點

相較傳統(tǒng)胰酶消化法,該試劑盒具有顯著優(yōu)勢:

·選擇性解離:通過調(diào)控酶切位點(Kex2蛋白酶切割位點改造),使神經(jīng)元-膠質(zhì)細胞分離效率差達4.6:1

·活性保持ATP含量維持在8.2±0.3nmol/mg prot,顯著高于常規(guī)方法(5.1±0.5nmol/mg prot

·兼容性強所得細胞懸液可直接用于10x Genomics單細胞測序(細胞捕獲率>75%)、流式檢測(CD133+細胞占比誤差<2%)等

四、質(zhì)量驗證指標(biāo)

嚴格遵循《中國藥典》生物制品標(biāo)準(zhǔn):

檢測項目

標(biāo)準(zhǔn)值

實測均值

細胞活性

≥90%

93.5±2.1%

碎片率

≤5%

3.2±0.8%

線粒體膜電位

ΔΨm≥150mV

168±12mV

基因表達穩(wěn)定性

Ct值變異<0.5

0.32±0.07

該試劑盒通過ISO13485質(zhì)量體系認證,特別適用于阿爾茨海默癥模型小鼠(如5xFAD)海馬區(qū)細胞分離,為神經(jīng)退行性疾病研究提供可靠的技術(shù)解決方案。

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